Informação de financiamento: Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior; Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo
1. INTRODUÇÃO
O surto da síndrome respiratória aguda grave coronavírus 2 (SARS ‐ CoV ‐ 2) representa um desafio sem precedentes para a população, profissionais de saúde e governo em todo o mundo, tornando-se uma emergência global de saúde pública com crescente impacto na economia global . Em 11 de março de 2020, a Organização Mundial da Saúde (OMS) declarou o SARS ‐ CoV ‐ 2 uma pandemia. Em 23 de agosto de 2020, a infecção por SARS ‐ CoV ‐ 2 atingiu cerca de 23 milhões de casos confirmados em todo o mundo em mais de 213 países e causou mais de 800.000 mortes ( https://covid19.who.int ). Até o momento, nenhum tratamento específico se mostrou eficaz para a infecção por SARS ‐ CoV ‐ 2, além de cuidados de suporte.
A terapia de anticorpos passivos com plasma convalescente (CP), uma imunoterapia adaptativa clássica, tem sido aplicada à prevenção e tratamento de muitas doenças infecciosas ao longo de muitas décadas, desde a gripe A / H1N1 espanhola em 1917-1918 até a SARS em 2012. 1 A eficácia de a terapia passiva com anticorpos foi associada à concentração de anticorpos neutralizantes (nAbs) no plasma de pacientes recuperados. 2 O CP de pacientes que se recuperaram de uma infecção viral pode ser usado para melhorar as condições clínicas e a taxa de sobrevivência de pacientes com infecções virais agudas, incluindo SARS ‐ CoV ‐ 2, sem efeitos adversos graves. Os dados preliminares mostraram uma redução da carga viral, menor tempo de internação e menor mortalidade em pacientes infectados por SARS ‐ CoV ‐ 2 tratados com PC em comparação com aqueles que não foram.3 – 8
Os possíveis mecanismos relacionados à eficácia da terapia de CP no SARS ‐ CoV ‐ 2 incluem a transfusão passiva de anticorpos neutralizantes e um efeito imunomodulador via melhora da resposta inflamatória grave. 9 , 10 Pacientes infectados com SARS ‐ CoV ‐ 2 geralmente desenvolvem uma resposta imune primária entre os dias 10 e 14, que é seguida pela eliminação do vírus. 11 Portanto, teoricamente, deveria ser mais eficaz administrar o PC na fase inicial da doença. Um recente estudo pareado sugeriu que pacientes não intubados podem se beneficiar mais do que aqueles que requerem ventilação mecânica. 12No entanto, outros tratamentos podem influenciar a relação entre a PC e o nível de anticorpos, incluindo medicamentos antivirais, esteróides e imunoglobulina intravenosa.
Estamos conduzindo um estudo prospectivo randomizado para avaliar a eficácia da PC para pacientes com doença SARS ‐ CoV ‐ 2 moderada a grave. Doadores convalescentes foram recrutados na comunidade. Os pré-requisitos para doação de plasma incluem idade (> 18 anos); nenhuma gravidez anterior; tempo decorrido desde o último dia de sintomas (> 14 dias); evidência laboratorial de infecção prévia por SARS ‐ CoV ‐ 2; e triagem negativa para doenças infecciosas transmissíveis pelo sangue (HIV 1 + 2, HTLV 1 + 2, hepatites B e C, sífilis e doença de Chagas). Além disso, também avaliamos o nível de anticorpos neutralizantes (nAbs) e a ausência de RNAemia em uma amostra de sangue antes da coleta de plasma. Como os nAbs desempenham papéis importantes na eliminação do vírus e têm sido considerados um produto imunológico chave para o tratamento contra doenças virais,https://www.fda.gov/media/136798/download ).
No entanto, os ensaios de neutralização para SARS ‐ CoV ‐ 2 são limitados em disponibilidade e rendimento, exigindo instalações de nível 3 de biossegurança e mão de obra qualificada. Uma vez que esse ensaio geralmente não está disponível, uma alternativa é realizar o teste posteriormente em uma amostra armazenada ou realizar outro teste para detectar a presença de anticorpo anti-SARS-CoV-2 antes de enviar a unidade de plasma para transfusão.
A correlação entre os títulos de anticorpos dos imunoensaios e os anticorpos neutralizantes não foi exaustivamente investigada e o conhecimento dessa associação pode ajudar a tomar melhores decisões terapêuticas.
O objetivo deste estudo é avaliar o desempenho de critérios baseados nos resultados de imunoensaios anti ‐ SARS ‐ CoV ‐ 2 para a predição de títulos elevados de nAbs em doadores de PC.
2. MATERIAIS E MÉTODOS
2.1 Recrutamento de coorte
Duzentos e sessenta e três indivíduos convalescentes foram avaliados em abril de 2020 para doação de plasma convalescente por aférese. O SARS ‐ Cov ‐ 2
a infecção foi previamente confirmada por Reação em Cadeia da Polimerase-Transcrição Reversa em Tempo Real (RT-PCR) do material coletado do
trato respiratório (nasofaringe ou orofaringe). Todos os candidatos forneceram consentimento informado por escrito e testaram negativo para SARS-CoV-2 por RT-PCR. Amostras de sangue foram coletadas de todos os participantes para a realização do imunoensaio SARS ‐ CoV ‐ 2 IgG e RT ‐ PCR de sangue. Duzentos e quatorze foram testados para anticorpos neutralizantes.
2.2 imunoensaios de imunoglobulina G (IgG)
Dois imunoensaios comerciais compreendendo a proteína estrutural do SARS ‐ CoV ‐ 2 (domínio S1) foram testados em paralelo com todas as amostras coletadas: Anti ‐ SARS ‐ CoV ‐ 2 ELISA IgG EUROIMMUN (Lübeck, Alemanha) e Anti ‐ SARS ‐ CoV ‐ 2 Quimioluminescência IgG Abbott (Chicago, EUA). Os testes foram realizados de acordo com as instruções do fabricante. Os valores de corte para resultados positivos foram 1,1 e 1,4 para os ensaios Euroimmun e Abbott, respectivamente.
2.3 Reação em cadeia da polimerase por transcriptase reversa quantitativa (RT-qPCR)
Amostras de sangue com DO / CO ≥3 no imunoensaio de IgG foram submetidas a SARS ‐ CoV ‐ 2 RT ‐ qPCR usando o método TaqMan. Um quantitativa em casa ensaio de PCR em tempo real amplificar o vírus de RdRp RNA polimerase dependente de RNA e de envelope foi aplicado para determinar o número de cópias de SARS-CoV-2. 13 O teste teve sensibilidade de aproximadamente 100 cópias / mL. Em todas as reações de amplificação, foram utilizados controles positivos e negativos e um controle interno exógeno.
2.4 Teste de neutralização de vírus baseado em efeito citopático (CPE-VNT)
Duzentas e quatorze amostras foram testadas para anticorpos neutralizantes (nAbs) usando o teste de neutralização de vírus baseado no efeito citopático (CPE-VNT). O CPE-VNT foi adaptado de Nurtop et al., 2018 14 e já foi descrito em Wendel et al., 2020. 15 Resumidamente, 5 × 10 4 células / mL de células Vero (ATCC CCL ‐ 81) foram semeadas 24 horas antes da infecção em uma placa de 96 poços. As amostras de plasma foram inicialmente inativadas por 30 minutos a 56 ° C. Usamos 8 diluições (2 vezes) de cada plasma (1:20 a 1: 2560). Posteriormente, o plasma foi misturado vol / vol com 10 3 TCID 50 / mL de SARS ‐ CoV ‐ 2 / humano / BRA / SP02cc / cepa de vírus 2020 (número de acesso GenBanK: MT350282.1) 16e pré-incubado a 37 ° C por 1 hora para permitir a neutralização do vírus. Em seguida, a mistura de plasma mais vírus foi transferida para a monocamada de células confluentes e incubada por 3 dias a 37 ° C, sob 5% de CO 2 . O título de neutralização de vírus referido a VNT 100 é descrito como a maior diluição de soro que neutralizou o crescimento do vírus (ausência de efeito citopático). Em cada ensaio, um soro de controle positivo interno garantido forte (RT ‐ qPCR positivo + PRNT 90 > 640) 17 foi usado, bem como uma amostra de soro pré ‐ surto negativa. Todos os procedimentos relacionados ao CPE ‐ VNT foram realizados em laboratório de biossegurança nível 3, de acordo com as recomendações da OMS. 18
2.5 Análise estatística
Foi realizada análise descritiva por meio de medidas de frequências, tendência central e posição. Os testes não paramétricos de Mann ‐ Whitney e Kruskall ‐ Wallis foram usados para comparar os valores de nAbs em diferentes grupos e o método post ‐ hoc de Bonferroni foi aplicado para ajustar os resultados para comparações múltiplas. As variáveis idade e dias desde o último sintoma foram testadas segundo grupos de tercis dos valores de distribuição.
Modelos de regressão linear simples foram usados para avaliar a relação entre os valores de ELISA S / CO e a concentração dos títulos de nAbs. O valor preditivo dos testes de imunoensaio (Abbott e Euroimmun) para a identificação de nAbs ≥160 foi avaliado por meio de gráficos de curvas ROC. 19Em seguida, foram calculados a sensibilidade, especificidade, valores preditivos e acurácia de quatro pontos de corte obtidos por diferentes métodos: (a) Método do índice de Youden que maximiza a soma entre Sensibilidade e Especificidade; (b) Método da “Eficiência Máxima” que se baseia na maximização da frequência de casos corretamente classificados (verdadeiros positivos ou verdadeiros negativos); (c) O método “PROC01” que é o ponto na curva ROC mais próximo do ponto (0,1) ou canto superior esquerdo do gráfico; (d) um último método que estabeleceu um valor fixo para a sensibilidade (= 90%) e procurou maximizar a especificidade. 19 , 20
Para validar os critérios de doação propostos, a amostra total estudada foi dividida em duas partes (amostra de desenvolvimento e amostra de validação) de acordo com a data de inscrição no estudo. Para esta análise, a amostra inicial de 214 doadores foi dividida em tercis de acordo com a data do cadastramento. Os primeiros dois terços da amostra (amostra de desenvolvimento) foram utilizados para desenvolver os critérios, enquanto o último terço da amostra (amostra de validação) foi utilizado para avaliar o desempenho dos critérios propostos. Três critérios diferentes foram desenvolvidos; (1) o primeiro critério estabeleceu um ponto de corte S / CO de 4,65 com base no método do índice de Youden; (2) o segundo critério foi estabelecido com base nos resultados de um modelo de árvore de decisão condicional simples usando apenas o resultado do teste ELISA como variável explicativa; e (3) o terceiro critério foi estabelecido com base nos resultados de um modelo multivariado de árvore de decisão condicional usando o resultado do teste ELISA e as seguintes variáveis: idade, sexo, necessidade de hospitalização para tratamento de SARS ‐ CoV ‐ 2 e o tempo decorrido desde o fim dos sintomas. Todas as análises foram realizadas no ambiente R usando o software RStudio.19 , 20
3. RESULTADOS
3.1 População estudada de doadores
Foram avaliados 263 doadores de CP em potencial, dos quais 49 foram excluídos da análise porque faltavam títulos de nAbs (n = 35) ou porque a avaliação foi realizada menos de 10 dias após a resolução dos sintomas (n = 14) (Figura 1 Suplementar Material, Figura S1 ).
A Tabela 1 mostra os dados descritivos da amostra analisada. A maioria dos doadores era do sexo masculino (57,9%) e jovem (idade mediana de 35 anos / IQR = 15). As duas comorbidades clínicas mais comuns foram hipertensão arterial sistêmica (8,7%) e doença pulmonar (6,5%).
| Masculino, n (%) | 124 (57,9) |
| Anos de idade, mediana (IQR) | 35 (30-45) |
| Hospitalização, n (%) | 15 (7,0) |
| Duração dos sintomas (dias), mediana (IQR) | 11 (7 a 14) |
| Início dos sintomas – Inscrição (dias), mediana (IQR) | 31 (27-39) |
| Fim dos sintomas – Inscrição (dias), mediana (IQR) | 20 (17-26) |
| Comorbidades, n (%) | |
| Hipertensão | 18 (8,4) |
| Diabetes mellitus | 2 (0,9) |
| Doença pulmonar | 14 (6,5) |
| Doença cardíaca | 1 (0,5) |
| Uso do tabaco | 7 (3,3) |
- Abreviatura : IQR, intervalo interquartil.
3.2 Correlação entre títulos de nAbs e fatores clínicos / demográficos
Os títulos de nAbs da amostra estudada variaram amplamente. Aproximadamente 1 em cada 5 doadores (19,1%) tinha títulos de nAbs <1:80 (Figura 2 Material Suplementar, Figura S2 ). Os títulos foram significativamente maiores entre: (a) homens (diferença da mediana = 160 nAbs, P <0,001), (b) indivíduos no tercil superior de idade (diferença da mediana para o tercil inferior = 160 nAbs, P = 0,003) , e (c) indivíduos que precisaram de hospitalização para tratar SARS ‐ CoV ‐ 2 (diferença da mediana = 1120 nAbs, P <0,001). Os doadores com um tempo mais curto entre o final dos sintomas e a inscrição tiveram títulos de nAbs ligeiramente mais elevados, mas sem significância estatística ( P = 0,067) (Figura 3 Material Suplementar,Figura S3 ).
3.3 Desempenho dos imunoensaios avaliados
A distribuição dos valores S / CO obtidos a partir dos dois imunoensaios avaliados (Abbott e Euroimmun) é mostrada na Figura 1 , letra A. Uma distribuição muito semelhante foi observada. Os valores médios de S / CO foram 4,65 (IQR 2,70-7,18) e 5,61 (IQR 2,72-9,10) para Abbott e Euroimmun, respectivamente.
Houve uma correlação positiva entre os títulos de S / CO e nAbs para os ensaios Abbott (R 2 = 0,617; P <0,001) e Euroimmun (R 2 = 0,526; P <0,001) (Figura 1 , letra B). Além disso, o valor preditivo para identificar títulos de nAbs ≥160 foi semelhante entre os dois ensaios, com valor de AUC de 0,878 (IQR 0,83-0,92) e 0,885 (IQR 0,84-0,93) para Abbott e Euroimmun, respectivamente ( P = 0,803) ( Figura 1 , letra C). Como os dois ensaios apresentaram desempenho semelhante, os resultados foram analisados com o kit Abbott.
A Tabela 2 mostra as medidas de precisão de quatro diferentes pontos de corte para a identificação de valores de nAbs ≥160. Os pontos de corte obtidos pelos métodos de Youden e Maximum Efficiency apresentaram os maiores valores de acurácia e área sob a curva (AUC). Os métodos PROC01 e Sensibilidade = 90% apresentaram valores de AUC ligeiramente inferiores, apesar dos elevados valores de sensibilidade encontrados.
| Métodos para encontrar um corte ideal | ||||
|---|---|---|---|---|
| Youden | Eficiência máxima | PROC01 | Sensibilidade = 0,90 | |
| Corte S / CO | 4,65 | 3,81 | 1.05 | 2,8 |
| Abaixo do corte | 50,5% | 37,4% | 14,0% | 26,6% |
| Falso positivo | 3,7% | 9,8% | 22,4% | 15,9% |
| Precisão | 77,5% | 78,5% | 70,5% | 77,1% |
| Sensibilidade | 0,72 (0,64-0,80) | 0,83 (0,75-0,88) | 0,99 (0,96-100) | 0,90 (0,83-0,94) |
| Especificidade | 0,89 (0,80-0,95) | 0,72 (0,61-0,82) | 0,37 (0,26-0,49) | 0,55 (0,43-0,67) |
| PPV | 0,92 (0,86-0,95) | 0,84 (0,76-0,90) | 0,74 (0,63-0,99) | 0,78 (0,69-0,87) |
| NPV | 0,64 (0,55-0,81) | 0,69 (0,59-0,80) | 0,96 (0,83-0,98) | 0,75 (0,63-0,83) |
| AUC | 0,80 (0,75-0,85) | 0,77 (0,71-0,83) | 0,67 (0,62-0,73) | 0,72 (0,66‐0,78) |
- Abreviaturas : AUC, Área sob a curva; NPV, valor preditivo negativo; PPV, valor preditivo positivo; PROC01, minimiza a distância entre o gráfico da curva ROC e o ponto (0,1).
A próxima etapa foi determinar a precisão de diferentes pontos de corte S / CO para prever títulos de nAbs ≥160 (Tabela 2 ). Os pontos de corte obtidos pelos métodos de Youden e Máxima Eficiência apresentaram os maiores valores de acurácia e área sob a curva (AUC). Os métodos PROC01 e Sensibilidade mostraram valores de AUC ligeiramente inferiores, apesar dos elevados valores de sensibilidade encontrados.
3.4 Validação do corte S / CO como critério para selecionar doadores com altos títulos de nAbs
Para validar o ponto de corte ótimo S / CO, a amostra inicial de 214 doadores foi dividida em tercis a partir da data da entrevista. Os primeiros dois terços (amostra de desenvolvimento) foram usados para desenvolver os critérios, enquanto o último terço da amostra (amostra de validação) foi usado para validar os critérios propostos.
As características clínicas e laboratoriais da amostra de desenvolvimento (n = 147) e da amostra de validação (n = 67) são apresentadas na Tabela 3 . As duas amostras apresentaram características muito semelhantes em relação à idade, sexo, títulos de nAbs, valores de S / CO e necessidade de internação. No entanto, o tempo desde os últimos sintomas e recrutamento foi significativamente maior na amostra de validação (mediana 24, IQR 18‐29) dias, quando comparada à amostra de desenvolvimento (mediana 19, IQR 17‐24).
| Desenvolvimento (n = 147) | Validação (n = 67) | P | |
|---|---|---|---|
| Data de inscrição | 9 de abril a 11 de maio | 13 de maio a 1º de junho | – |
| Masculino, n (%) | 91 (61,9) | 33 (49,3) | 0,112 |
| Idade, mediana (IQR) | 35 (30-43) | 37 (31-46) | 0,308 |
| Hospitalização, n (%) | 9 (6,1) | 6 (9,0) | 0,564 |
| Fim dos sintomas – dias de inscrição, mediana (IQR) | 19 (17-24) | 24 (18-29) | <0,001 |
| Título de nAbs de SARS-CoV-2, mediana (IQR) | 160 (80-640) | 160 (80-640) | 0,618 |
| Títulos SARS-CoV-2 nAbs ≥ 160, n (%) | 97 (66,0) | 41 (61,2) | 0,599 |
| Teste positivo Elisa Abbott, n (%) | 123 (86,6) | 57 (85,1) | 0,931 |
| Elisa Abbott DO: CO, mediana (IQR) | 4,57 (2,72-7,17) | 5,17 (2,72-7,25) | 0,881 |
- Abreviatura : IQR, Interquartile interval.
Três critérios diferentes para a seleção de doadores foram testados com base nos resultados obtidos na amostra de desenvolvimento. O critério 1 calculou o melhor ponto de corte para identificação de títulos de nAbs ≥160 de acordo com o método do índice de Youden (S / CO> 4,65). Os critérios 2 e 3 foram elaborados a partir de árvores de decisão condicional. A Figura 2 ilustra o resultado da árvore condicional do critério 2, que propôs um critério para doação considerando apenas o resultado do imunoensaio. Nesse modelo, nove entre dez doadores potenciais (95,9%) com valores S / CO> 4,57 tinham títulos de nAbs ≥160. Por outro lado, a taxa de potenciais doadores não elegíveis para doação com títulos de nAbs ≥80 foi elevada no grupo com ELISA 42/55 positivo (76,4%).
O terceiro critério revelou que todos os doadores com valores de S / CO> 6,11 tinham títulos de nAbs ≥160 (sensibilidade = 100%) e um terço dos doadores (11/33) com o tempo desde o fim dos sintomas> 19 dias tinha títulos de nAbs <80. Todos os doadores com valores S / CO> 2,68 que relataram resolução mais recente dos sintomas (entre 10 e 19 dias antes do recrutamento) apresentaram valores de nAbs ≥80. Assim, o terceiro critério de doação testado na amostra de validação prevê a doação com base em valores S / CO> 4,57 e valores S / CO entre 2,68 e 4,57, desde que a resolução dos sintomas seja recente (entre 10 e 19 dias antes do recrutamento) ( Figura 3 ).
A análise de desempenho dos três critérios testados na amostra de validação apresentou resultados semelhantes. Em geral, melhores resultados foram observados para a predição de títulos de nAbs ≥1: 80 quando comparados aos resultados da predição de nAbs ≥160. O critério 3 demonstrou redução na taxa de potenciais doadores descartados (40,3%) e, principalmente, na taxa de falsos negativos. A precisão geral da previsão de nAbs ≥1: 80 aumentou de 71,6% para 76,1% (Tabela 4 ). Por outro lado, o teste do critério 3 na amostra de validação também aumentou acentuadamente a taxa de falsos positivos para predizer nAbs ≥1: 160 (Tabela 5 ).
| Critério 1 | Critério 2 | Critério 3 | |
|---|---|---|---|
| Corte DO / CO | 4,65 | 4,57 | 4,57 ou (2,68 + TSLS) |
| Abaixo do corte | 32 (47,8%) | 32 (47,8%) | 27 (40,3%) |
| Fração de falso positivo | 0 (-) | 0 (-) | 1 (1,5%) |
| Fração falso negativa | 19 (28,4%) | 19 (28,4%) | 15 (22,4%) |
| AUC | 0,82 (0,76-0,88) | 0,82 (0,76-0,89) | 0,82 (0,72-0,92) |
| Precisão global | 71,6% | 71,6% | 76,1% |
- Abreviaturas : AUC, Área sob a curva; TSLS, tempo desde o último sintoma.
| Critério 1 | Critério 2 | Critério 3 | |
|---|---|---|---|
| Corte DO / CO | 4,65 | 4,57 | 4,57 ou (2,68 + TSLS) |
| Abaixo do corte | 32 (47,8%) | 32 (47,8%) | 27 (40,3%) |
| Fração de falso positivo | 5 (7,5%) | 5 (7,5%) | 9 (13,4%) |
| Fração falso negativa | 11 (16,4%) | 11 (16,4%) | 10 (14,9%) |
| AUC | 0,77 (0,66-0,87) | 0,77 (0,66-0,87) | 0,70 (0,59-0,82) |
| Precisão global | 76,1% | 76,1% | 71,6% |
- Abreviaturas : AUC, Área sob a curva; TSLS, tempo desde o último sintoma.
4. DISCUSSÃO
A terapia de anticorpos passivos com plasma convalescente (CP), uma imunoterapia adaptativa, é uma alternativa para pacientes com SARS ‐ CoV ‐ 2 até que tratamentos mais definitivos, como anticorpos monoclonais, drogas antivirais ou vacina estejam disponíveis. Esse tratamento foi usado há mais de um século, durante o surto de gripe espanhola A / H1N1 em 1917-1918 e, mais recentemente, para epidemias de AIDS, MERS, SARS e EBOLA. 1 , 21 – 23Traz um paciente sofrendo de infecção grave e até letal, imunoglobulinas e possivelmente outros fatores imunorreguladores obtidos do plasma de doadores imunizados. O mecanismo de ação da terapia com plasma não está totalmente estabelecido e provavelmente vai além da administração de anticorpos neutralizantes. Especialmente em infecções respiratórias agudas graves de etiologia viral, um efeito imunomodulador por meio da administração de citocinas anti ‐ inflamatórias pode estar envolvido. 9
Até agora, não há nenhum ensaio clínico prospectivo randomizado bem desenhado que demonstre a eficácia da PC contra doenças infecciosas. No entanto, o Ministério da Saúde do Brasil está permitindo o uso de PC como um tratamento experimental para pacientes com infecção por SARS ‐ CoV ‐ 2 moderada ou grave. 24 É considerado um tratamento investigacional porque os estudos clínicos foram iniciados, mas ainda não foram concluídos. O sucesso da PC está relacionado à presença de altos títulos de nAbs no plasma doado. Até onde sabemos, o presente estudo foi o primeiro a correlacionar os resultados obtidos de dois imunoensaios amplamente disponíveis projetados para detectar anticorpos anti-SARS-CoV-2 com os títulos de nAbs.
Nossos dados mostram boa correlação entre os títulos de nAbs e os valores de S / CO obtidos de dois imunoensaios analisados, Abbott e Euroimmun ( P <0,001). Esses dados já foram observados em outros manuscritos que utilizaram um imunoensaio. 25 – 28 Um estudo anterior comparou o desempenho dos imunoensaios Ortho e Abbot IgG. Os autores encontraram melhor correlação entre S / CO e nAbs para Ortho em comparação com Abbott ao realizar a regressão linear, mas os resultados foram semelhantes ao usar o teste de correlação de Spearman, reforçando nossos resultados. 28O presente estudo é o primeiro relato que mostra uma correlação positiva entre os nAbs testados por um ELISA e um ensaio de quimioluminescência. Essa correlação é muito importante, pois muitos serviços não têm acesso para medir nAbs e, nesse cenário, um imunoensaio pode ser usado como uma triagem para detectar a presença de anticorpos anti-SARS-CoV-2 nas amostras de doadores convalescentes.
Além disso, testamos três critérios para identificar doadores de plasma convalescentes com altos títulos de nAbs. De acordo com o método de Youden, o melhor ponto de corte para a identificação de títulos de nAbs ≥160 é S / CO> 4,65. Quando um modelo de árvore de decisão condicional baseado apenas no resultado do imunoensaio foi avaliado, 95,9% dos doadores potenciais com valores S / CO> 4,57 tinham títulos de nAbs ≥160. Finalmente, o modelo de árvore de decisão condicional baseado não apenas nos resultados do imunoensaio, mas também no tempo de desaparecimento dos sintomas, revelou que todos os doadores com valores S / CO> 6,11 tinham títulos de nAbs ≥160 (sensibilidade = 100%) e todos doadores com valores de S / CO> 2,68 que relataram resolução mais recente dos sintomas (entre 10 e 19 dias antes do recrutamento) apresentaram títulos de nAbs ≥80.
Nossos resultados confirmam que os valores S / CO podem ser usados para identificar doadores de PC com alta probabilidade de ter títulos terapêuticos de nAbs. Esses achados suportam um algoritmo de triagem em que doadores com valores S / CO acima de 4,57 ou com corte maior que 2,68, mas com tempo de resolução dos sintomas abaixo de 19 dias, podem ser selecionados para doação de CP sem a necessidade de realizar titulação de nAbs. A análise de nAbs deve, então, ser restrita aos demais doadores com resultados de imunoensaio positivos.
Finalmente, este estudo também demonstrou a ampla variabilidade dos títulos de nAbs entre os indivíduos recuperados da infecção por COVID ‐ 19. Os títulos foram maiores entre os pacientes do sexo masculino, com idade avançada e que necessitavam de internação para tratamento do COVID ‐ 19. Esses dados reforçam informações anteriores disponíveis na literatura. 29
5. CONCLUSÃO
Avaliamos o desempenho dos imunoensaios Abbott e Euroimmun para rastreamento de IgG de pacientes convalescentes e a correlação entre os valores S / CO com os títulos de nAbs obtidos por CPE-VNT. Nossos resultados mostram que o valor de corte S / CO de 4,57 para o ensaio Abbott pode ser aplicado para identificar unidades de CP com títulos elevados de nAbs. Esses achados apóiam um algoritmo de triagem CCP no qual o imunoensaio para teste de IgG poderia ser realizado primeiro como um teste de qualificação e, na presença de S / CO> 4,57, unidades de CP seriam selecionadas para transfusão. As unidades de CP com S / CO entre 1,4 e 4,57 devem ser testadas posteriormente usando CPE-VNT para titular nAbs e ser enviadas para transfusão com base neste resultado.
AGRADECIMENTOS
O financiamento foi concedido pela Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP), projetos n o 2017 / 24769‐2 (RRGM), 2016 / 20045‐7 (ELD), 2020 / 06409‐1 (ELD) e pela Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES), projecto n o 88.887,131387 / 2016-00 (DBA).
CONFLITO DE INTERESSES
Os autores declaram não haver conflitos de interesse.
