Introdução
Identificar a infecção por SARS-CoV-2 requer testes diagnósticos. O PCR (Reação em Cadeia de Polimerase – material genético RNA) e testes baseados em antígenos confirmam a infecção presente, enquanto os testes de anticorpos indicam uma resposta imune ao vírus. É importante ressaltar que uma porcentagem significativa de infecções pode passar despercebida, por razões que incluem a falta de sintomas, baixa excreção viral e, em alguns países, atrasos na realização dos testes. Uma combinação de PCR e o teste de anticorpos pode melhorar o valor preditivo positivo (VPP) para a COVID-19, principalmente em pacientes sintomáticos.1
O teste de anticorpos é essencial para a vigilância da população (prevalência de não diagnosticados com a infecção), como um indicador para a potencial imunidade ou a resposta bem-sucedida à vacina (se os resultados do ensaio se correlacionam com a neutralização), e para a identificação de potenciais doadores de plasma convalescente. Por fim, um teste de anticorpos de alta qualidade e confiável será fundamental para a retomada com segurança em níveis sustentáveis da atividade econômica e da reabertura da sociedade. A arquitetura do ensaio e as características analíticas dos testes de anticorpos para SARS-CoV-2 são considerações importantes na escolha de um teste de anticorpos.
Tipos de testes de anticorpos
Quando um indivíduo é infectado pelo SARS-CoV-2, anticorpos se desenvolverão em diferentes estágios da infecção. Os testes de anticorpos totais SARS-CoV-2 detectam dois anticorpos simultaneamente (IgM e IgG) que se formam durante a resposta imune à infecção inicial. Os testes de anticorpo IgG para SARS-CoV-2 detecta, especificamente, os anticorpos IgG que persistem e são a base da resposta imune a longo prazo dos indivíduos.
A combinação dos ensaios de anticorpos Ensaio de Anticorpos SARS-CoV-2 Total e o Ensaio de Anticorpos SARS-CoV-2 IgG fornece uma visão mais completa da sorologia de um paciente ao longo de seus cuidados contínuos.
O ensaio COV2T detecta IgM e os anticorpos IgG de longa duração. Este teste pode indicar infecção recente ou passada em pacientes e é indicado para detectar uma resposta imune precoce. O ensaio COV2G permite aos médicos detectar especificamente o nível de anticorpos IgG no sangue de um paciente e avaliar as mudanças relativas ao longo do tempo. Este teste é mais apropriado para um estágio posterior da doença ou uma infecção passada, e fornece aos médicos um valor de IgG basal que pode ser utilizado para rastrear a duração a longo prazo da resposta imune do indivíduo. A comparação dos resultados numéricos ajudará a determinar como a resposta imune se desenvolve e persiste ao longo do tempo.
Estudo da Universidade de Leipzig: Comparação da sensibilidade do diagnóstico de testes de anticorpos baseados em nucleoproteína e glicoproteína do SARS-CoV-22
A Universidade de Leipzig avaliou a sensibilidade de sete ensaios de sorologia para SARS-CoV-2 comercialmente disponíveis. Amostras de soro foram obtidas de 57 pacientes com resultados de PCR positivos, a maioria dos quais teve a doença de forma leve a moderada (nenhum em estado grave ou que necessitou de cuidados hospitalares). Em 16 pacientes foram coletadas duas amostras, 25 amostras de sangue foram coletadas 2 a 3 vezes após um resultado de PCR positivo e 48 amostras de sangue foram retiradas após 4 semanas de um resultado de PCR positivo.
Conforme a Tabela 1, o Ensaio Siemens Healthineers Atellica® IM SARS-CoV-2 Total (COV2T) mostrou uma sensibilidade diagnóstica de 80,0% (95% CI 59,3–93,2) para amostras de soro coletada de 2–3 semanas após o resultado positivo do PCR (n = 25), 100% (95% CI 92,8–100) para amostras de sangue coletadas com mais de 4 semanas após o resultado positivo de PCR (n = 48) e uma sensibilidade global de 93,2% (95% CI 84,8–97,8) para todas as amostras testadas no estudo. Em todos os cenários, a sensibilidade do Ensaio Atellica IM COV2T foi igual ou maior a dos outros métodos testados.
Tabela 1. Diagnóstico de sensibilidade de sete testes de anticorpos baseados em nucleoproteína e glicoproteína para SARS-CoV-2.
Ensaio SARS-CoV-2 (IgG) | Anti-SARS-CoV-2 ELISA (IgG) | Anti-SARS CoV-2 ELISA (IgG) | SARS-CoV-2 ELISA
(IgG) |
Anti SARS-CoV-2 (Total) | SARS-CoV-2 ELISA
(IgG) |
Siemens Healthineers SARS-CoV-2 Total | |
Equipamento | Automação | Manual | Manual | Manual | Automação | Manual | Analisador Atellica® IM |
Alvo de Detecção | Proteína nucleocapsídeo | Proteína spike (S1) | Proteína spike (S1 RBD) | Proteína nucleocapsídeo | Proteína nucleocapsídeo | Proteína nucleocapsídeo | Proteína spike (S1 RBD) |
2–3 semanas após
resultado positivo do PCR (n = 25) |
80,0% (95% CI 59,3–93,2) |
72,0%
(95% CI 50,6–87,9) |
52,0%
(95% CI 31,3–72,2) |
72,0%
(95% CI 50,6–87,9) |
80,0%
(95% CI 59,3–93,2) |
64,0%
(95% CI 42,5–82,0) |
80,0%
(95% CI 59,3–93,2) |
≥4 semanas após
resultado positivo do PCR (n = 48) |
83,3%
(95% CI 69,7–92,5) |
89,6%
(95% CI 77,4–96,5) |
70,8%
(95% CI 55,9–83,0) |
66,7%
(95% CI 51,6–79,6) |
95,8%
(95% CI 85,7–99,5) |
66,7%
(95% CI 51,6–79,6) |
100%
(95% CI 92,8–100) |
Total (n = 73) | 82,2%
(95% CI 71,5–90,2) |
83,6%
(95% CI 73,1–91,2) |
64,4%
(95% CI 52,3–75,3) |
68,5%
(95% CI 56,6–78,9) |
90,4%
(95% CI 81,2–96,1) |
65,8%
(95% CI 53,8–76,5)
|
93,2%
(95% CI 84,8–97,8) |
Estudo de sorologia do SARS-CoV-2 da Public Health England (PHE)3
Este estudo comparou quatro imunoensaios para SARS-CoV-2 comercialmente disponíveis para critérios clínicos de sensibilidade (≥98% em casos confirmados por PCR coletados ≥20 dias após o aparecimento dos primeiros sintomas) e especificidade (≥98% em amostras coletadas >6 meses antes da identificação dos primeiros casos de infecção por SARS-CoV-2) com base no Perfil de Produto Alvo (TPP) da Agência Regulatória de Medicamentos e Produtos de Saúde (MHRA) do Reino Unido para “imunoensaios enzimáticos” para SARS-CoV-2. A avaliação foi conduzida pela PHE (Porton Down) e pela Universidade de Oxford e pelo NHS Foundation Trust do Hospital Universitário de Oxford em Maio e Junho de 2020. Este estudo foi o primeiro a avaliar os ensaios comerciais automatizados de sorologia para SARS-CoV-2 em um conjunto grande e bem caracterizado de amostras (aproximadamente 1500).
A sensibilidade foi avaliada em 536 amostras positivas para infecção por SARS-CoV-2 em ≥20 dias após o início dos sintomas. A especificidade foi avaliada em 994 amostras pré pandêmicas (2015–2018) de adultos saudáveis.
Conforme mostrado na Tabela 2, o Ensaio SARS-CoV-2 Total (COV2T) Siemens Healthineers Atellica IM mostrou especificidade de 99,9% (95% CI 99,4–100) e sensibilidade de 98,1% (95% CI 96,6–99,1). Em todos os casos, a especificidade e sensibilidade do Ensaio COV2T Atellica IM foram iguais ou superiores aos outros métodos testados e foi o único método, entre os quatro testados, a atender os critérios MHRA para especificidade e sensibilidade.
Tabela 2. Especificidade e sensibilidade clínicas de quatro ensaios comerciais para SARS-CoV-2.
SARS-CoV-2
IgG |
SARS-CoV-2 S1/S2 IgG | AntiSARS-CoV-2 (Total) | Siemens Healthineers SARS-CoV-2 Total | |
Alvo de Detecção | Proteína nucleocapsídeo | Proteína spike (S1/S2) | Proteína nucleocapsídeo | Proteína spike (S1 RBD) |
Local do Estudo | Hospital John Radcliffe, Bioquímica Clínica e laboratórios, Oxford | Hospital John Radcliffe, Bioquímica Clínica e laboratórios, Oxford | PHE Porton Down | PHE Porton Down |
Especificidade | 99,9% 993/994
(95% CI 99,4–100) |
98,6% 980/994
(95% CI 97,6–99,2) |
99,8%
992/994 (95% CI 99,3–100) |
99,9% 993/994
(95% CI 99,4–100) |
Sensibilidade >20 dias | 92,7% 497/536
(95% CI 90,2–94,8) |
95,0% 509/536
(95%CI 92,8–96,7) |
97,2% 521/536
(95% CI 95,4–98,4) |
98,1%
526/536 (95% CI 96,6–99,1) |
Análise de reatividade cruzada do Hospital St. Jansdal
A potencial reatividade cruzada de amostras de pacientes sem SARS-CoV-2 com outras cepas de coronavírus (falso positivo) é uma preocupação para os laboratórios. Este laboratório na Holanda testou o Ensaio SARS-CoV-2 Total (COV2T) Atellica IM com amostras de três pacientes com potenciais reações cruzadas com outros dois coronavírus (OC43, NL63), confirmados por PCR. Conforme mostrado na Tabela 3, nenhuma reatividade cruzada foi observada para o Ensaio COV2T Atellica IM.
Tabela 3. Análise de reatividade cruzada do coronavírus.
Paciente | Cepa Coronavírus | Data do PCR para CoV | Resultados do Ensaio COV2T Atellica IM | Dias após CoV PCR | Dias após início dos sintomas |
1 | OC43 | Março 2020 | Negativo | 34 | 38 |
2 | OC43 | Março 2020 | Negativo | 43 | 55 |
3 | NL63 | Março 2020 | Negativo | 28 | ND |
Hospital Universitário de Tübingen: Avaliação de três testes de anticorpos para SARS-CoV-2 totalmente automatizados4
O Hospital Universitário de Tübingen na Alemanha examinou a especificidade e sensibilidade dos ensaios para SARS-CoV-2. As amostras de soro foram obtidas de 58 pacientes com resultado do PCR positivo para SARS-CoV-2. Também foram avaliadas 123 amostras negativas, incluindo 88 coletadas antes de dezembro de 2019.
Conforme mostrado na Tabela 4, o Ensaio SARS-CoV-2 Total (COV2T) no sistema ADVIA Centaur® XPT mostrou uma especificidade de 100% para as 123 amostras negativas para SARS-CoV-2.
A sensibilidade foi de 56,5% para as amostras de soro coletadas entre 0 a 6 dias após o resultado positivo do PCR (n = 23), foi de 90,3% para amostras coletadas entre 7 e 13 dias após o resultado positivo do PCR (n = 31), e 97,0% para amostras coletadas com mais de 14 dias após o resultado positivo do PCR (n = 132). Em todos os casos, exceto um, a sensibilidade do ensaio COV2T ADVIA Centaur foi igual ou superior aos outros métodos testados.
Tabela 4. Especificidade e sensibilidade de três testes de anticorpos para SARS-Cov-2 totalmente automatizados.
Anti-SARS-CoV-2-ELISA (IgG) | Anti-SARS-CoV-2 (Total) | Siemens Healthineers Ensaio SARS-CoV-2 Total | |
Alvo de detecção | Proteína spike (S1) | Proteína nucleocapsídeo | Proteína spike (S1 RBD) |
Especificidade | 98%
(3/123†) |
100% (0/123) | 100%
(0/123) |
0–6 dias após PCR positivo (n = 23) | 56,5% (13/23*) | 65,2% (15/23) | 56,5% (13/23) |
7–13 dias após PCR positivo (n = 31) | 83,9% (26/31) | 90,3% (28/31) | 90,3% (28/31) |
≥14 dias após PCR positivo (n = 132) | 95,5% (126/132) | 89,4% (118/132) | 97,0% (128/132) |
*Se os resultados limites forem considerados positivos.
Este laboratório também testou o potencial de reatividade cruzada dos três ensaios com amostras de três pacientes que haviam tido infecções com outros coronavírus (HKU-1, NL63, e 229E) confirmadas por PCR. Os resultados dos testes não demonstraram reatividade cruzada nos três ensaios.
Centro Médico Universitário de Hamburg-Eppendorf: Avaliação clínica de cinco ensaios sorológicos automatizados para SARS-CoV-2 em coorte de pacientes hospitalizados com COVID-195
O Centro Médico Universitário de Hamburg-Eppendorf na Alemanha avaliou a especificidade e sensibilidade de cinco ensaios para SARS-CoV-2. As amostras de soro ou plasma foram obtidas de 75 pacientes com resultado de PCR positivo para SARS-CoV-2 e 320 amostras pré-pandêmicas, obtidas em março de 2017, também foram analisadas. Como mostrado na Tabela 5, o Ensaio SARS-CoV-2 Total (COV2T) da Siemens Healthineers no Analisador Atellica IM mostrou uma especificidade de 100% (CI 98,8–100%) para as 320 amostras controles. A sensibilidade foi de 35,1% (CI 21,8–51,2%) para as amostras coletadas entre 1 e 10 dias após o início dos sintomas (n = 37) e 73,7% (CI 58,0–85,0%) para amostras coletadas acima de 10 dias após o início dos sintomas (n = 38).
Tabela 5. Especificidade e sensibilidade de cinco ensaios sorológicos para SARS-CoV-2 automatizados.
SARS-CoV-2 S1/S2 IgG | Anti-SARS-CoV-2 ELISA (IgG) | Anti-SARS-CoV-2 Total | SARS-CoV-2 Ab ELISA (Total) | Siemens Healthineers Atellica IM
SARS-CoV-2 Total |
|
Alvo de detecção | S1/S2 | Proteína spike (S1) | Proteína nucleocapsídeo | Antígeno recombinante SARS-CoV-2 (RBD) | Proteína spike (S1 RBD) |
Especificidade (n = 320) | 99,1% (97,3–99,7%) | 99,1% (97,3–99,7%) | 99,7% (98,3–100%) | 99,4% (97,8–100%) | 100% (98,8–100%) |
1–10 dias após o início dos
sintomas (n = 37) |
29,7% (17,5–45,8%) | 27,0% (15,4–43,0%) | 46,0% (31,0–61,6%) | 73,0% (57,0–84,6%) | 35,1% (21,8–51,2%) |
>10 dias após o início dos sintomas (n = 38) | 68,4%
(52,5 –80,9%) |
70,3% (54,2–82,5%) | 79,0% (63,7–88,9%) | 81,6% (66,6–90,8%) | 73,7% (58,0–85,0%) |
Análise de reatividade cruzada do Hospital de Northwest
Este laboratório na Holanda avaliou o potencial de reação cruzada do Ensaio SARS-CoV-2 Total (COV2T) da Siemens Healthineers no sistema ADVIA Centaur® XPT com amostras de três pacientes que haviam tido infecções com outro coronavírus (OC43) e confirmado por PCR. Conforme mostrado na Tabela 6, nenhuma reatividade cruzada foi observada para o ensaio COV2T no ADVIA Centaur.
Tabela 6. Análise de reatividade cruzada de coronavírus.
Paciente | Vírus | SARS-CoV-2 Total Siemens Healthineers | Dias após PCR |
1 | OC43 | Negativo | 10 dias |
2 | OC43 e metapneumovírus humano | Negativo | 1 mês |
3 | OC43 e rinovírus | Negativo | 3,5 meses |
Referências:
- Kai-Wang To K, et al. Temporal profiles of viral load in posterior oropharyngeal saliva samples and serum antibody responses during infection by SARS-CoV-2: an observational cohort study. Lancet Infect Dis. 2020;20:565-74.
- Schnurra C, Reiners N, Biemann R, Kaiser T, Trawinski H, Jassoy C. Comparison of the diagnostic sensitivity of SARS-CoV-2 nucleoprotein and glycoprotein-based antibody tests. Journal of Clinical Virology. 2020. doi: https://doi.org/10.1016/j. jcv.2020.104544
- Evaluation of sensitivity and specificity of four commercially available SARS-CoV-2 antibody immunoassays. Public Health England. 2020 Jul. GW-1386
- Hörber S, et al. Evaluation of three fully-automated SARS-CoV-2 antibody tests. Clin Chem Lab Med. 2020. https://doi.org/10.1515/cclm-2020-0975
- Pflüger LS, et al. Clinical evaluation of five different automated SARS-CoV-2 serology assays in a cohort of hospitalized COVID-19 patients. Journal of Clinical Virology. 2020;130:104549.
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